Инструкция по Бактериологическое Исследование Подстилочного Материала

Уважаемый гость, на данной странице Вам доступен материал по теме: Инструкция по Бактериологическое Исследование Подстилочного Материала. Скачивание возможно на компьютер и телефон через торрент, а также сервер загрузок по ссылке ниже. Рекомендуем также другие статьи из категории «Инструкции».

Инструкция по Бактериологическое Исследование Подстилочного Материала.rar
Закачек 1977
Средняя скорость 9679 Kb/s
Скачать

Инструкция по Бактериологическое Исследование Подстилочного Материала

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Иерсиниоз — острое инфекционное заболевание людей и животных разных видов, включая птиц. Возбудителями болезни являются патогенные штаммы Yersinia enterocolitica, относящиеся к роду Yersinia, семейству Enterobacteriaceae.

1.2. Бактерии вида Y. enterocolitica широко распространены в природе ввиду высокой адаптации к сапрофитному образу жизни, что является одной из характерных биологических особенностей данного вида бактерий. Наряду с сапрофитными свойствами многие штаммы иерсиний проявляют патогенные свойства за счет токсигенности, адгезивности, инвазивности и способности противостоять фагоцитозу в организме теплокровных животных. Резервуаром возбудителя иерсиниоза помимо больных животных являются объекты окружающей среды — вода, почва, растительные корма, пищевые продукты, особенно молоко.

1.3. Иерсиниоз чаще протекает в кишечной форме, но иногда развивается бактериемия с поражением различных внутренних органов. В зависимости от продолжительности болезни она может иметь острое и подострое течение.

У взрослых животных клинические признаки болезни обычно отсутствуют. В отдельных случаях могут быть артриты, аборты, эндометриты, маститы и еще реже — диарея.

1.4. Патологоанатомические изменения у погибших от иерсиниоза животных имеют картину катарального или катарально-геморрагического гастроэнтерита с наличием точечных, пятнистых и полосчатых кровоизлияний на слизистой оболочке тонкого и толстого отделов кишечника; мезентериальные лимфатические узлы увеличены, на разрезе розово-красного или вишневого цвета. В брюшной полости может содержаться серозный экссудат светло-желтого цвета. Селезенка иногда имеет утолщенные края или слегка увеличена с точечными кровоизлияниями под капсулой; печень нередко перерождена, глинистого цвета, пульпа на разрезе имеет дряблую консистенцию и легко снимается при соскобе.

1.5. Диагноз иерсиниоза у животных ставят на основании результатов бактериологического и молекулярно-генетического исследования (ПЦР) с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков болезни и патологоанатомической картины.

1.6. При убое и разделке туш животных-бактерионосителей может происходить контаминация иерсиниями мяса этих животных и получаемых от них субпродуктов в результате загрязнения частицами фекалий, помета птиц, содержимого кишечника, через режущие необеззараженные инструменты, тару и пр.

1.7. Возможность контаминации различных растений, корнеплодов, злаковых и бахчевых культур иерсиниями обусловлена способностью этих бактерий продолжительное время выживать и размножаться при температуре от +4 до +40°С в воде и влажной почве, богатой органическими веществами. В связи с этим растительные культуры и приготовленные из них салаты и корма могут быть источником заражения людей и животных патогенными штаммами иерсинии. Установлено, что в период вегетации растений, выросших на почвах, в которые попадают сточные воды с животноводческих ферм, иерсинии проникают внутрь растений. И хотя в таких случаях в смывах с овощей указанные бактерии не удается обнаружить, но при измельчении зеленой массы из выделяемого сока может быть выделена культура иерсиний.

2. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

2.1. Целью бактериологического исследования материала на иерсиниоз является выделение чистой культуры возбудителя болезни с изучением ее морфологических, тинкториальных, культуральных и ферментативных свойств и определение патогенности в пластинчатой РА с помощью диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний (СПИ), входящей в состав «Тест-системы для идентификации патогенных штаммов Yersinia enterocolitica».

2.2. Взятие материала и пересылка его для лабораторного исследования

2.2.1. Для прижизненной диагностики иерсиниоза в лабораторию направляют материал от больных животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами, отобранный в стерильные пробирки (флаконы) с резиновыми пробками:

а) фекалии в количестве 2-3 г, отобранные непосредственно из прямой кишки с помощью предварительно прокипяченного резинового катетера или в момент дефекации;

б) молоко в количестве 10-15 мл, взятое выборочно от 15-20 коров стада после санитарной обработки молочной железы и сдаивания первых порций молока — одна сборная проба. В зависимости от поголовья коров на ферме количество сборных проб молока может варьировать в пределах от 3 до 5. Молоко должно быть доставлено в лабораторию для исследования в день взятия пробы. При отсутствии такой возможности молоко консервируют кристаллической борной кислотой (0,1 г на 10 мл). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.

2.2.2. Для посмертной диагностики в лабораторию направляют материал от погибших или вынужденно убитых животных, желательно не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами.

2.2.3. Для диагностики иерсиниоза птиц из неблагополучных секций птичника направляют по 3-5 свежих трупов или 3-5 птиц с клиническими признаками диареи. Больную птицу убивают в лаборатории и подвергают патологоанатомическому и бактериологическому исследованию.

2.2.4. Пробы мясного сырья, молока и сливок для бактериологического исследования отбирают согласно правилам и в количествах, предусмотренных следующими ГОСТами:

2.2.5. Корнеплоды, хранящиеся в овощехранилищах или буртах, подвергают исследованию не ранее чем через 30 дней после их закладки. Пробы растительных кормов для исследования на наличие в них бактерий вида Yersinia enterocolitica отбирают согласно следующим ГОСТам:

2.2.6. Пробы материала, отобранные для бактериологического исследования, упаковывают в полиэтиленовые пакеты или во влагонепроницаемую тару и в тот же день направляют в лабораторию. Если материал (органы, ткани и фекалии животных) доставить в лабораторию в течение 3-4 ч не представляется возможным, особенно в теплое время года, его консервируют стерильным 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина, объем которого должен превышать объем материала в 2-3 раза.

СХЕМА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛА НА ВОЗБУДИТЕЛЬ ИЕРСИНИОЗА

СХЕМА бактериологического исследования патологического материала на иерсиниоз

2.3. Исследование материала

2.3.1. Присланный в лабораторию материал исследуют в день его поступления, соблюдая правила асептики.

2.3.2. Для выделения иерсиний из исследуемого материала используют жидкую селективную среду обогащения — И-бульон, разлитый в пробирки в количестве 4-5 мл, и одну из плотных дифференциально-диагностических или селективных сред, разлитую в чашки Петри и подсушенную в течение 40-60 мин в термостате: — И-агар; селективные среды для выделения иерсиний компании «HiMedia Laboratories Limited» или фирмы «OXOID» — СМ 653; агар Эндо; среду с желчью и индикатором бромтимоловым синим — СБТС; или среду для выделения иерсиний (г.Махачкала).

2.3.3. Пробы фекалий и соскобы со слизистой кишечника, корня языка и заглоточных миндалин (две последние пробы можно объединить) в количестве приблизительно 0,5 г переносят в пробирки с 8-10 мл стерильного физиологического раствора и суспендируют. Взвесь отстаивают при комнатной температуре в течение 10-15 минут. Надосадочную жидкость после оседания крупных частиц в количестве 0,2-0,4 мл высевают в И-бульон в пробирке.

2.3.4. Из печени, селезенки, почки, лимфатических узлов вырезают ножницами кусочки размером не менее 1-1,5 мл, увлажняют спиртом, обжигают поверхность до сгорания спирта, после чего помещают в пробирки с 3-5 мл стерильного физиологического раствора, суспендируют и высевают взвесь по 0,2-0,3 мл в И-бульон в пробирке.

2.3.5. Кровь из сердца, желчь, головной и костный мозг отсасывают по 0,2-0,3 мл пастеровскими пипетками и вносят в пробирки с И-бульоном, которые встряхивают для перемешивания материала.

2.3.6. Для исследования мяса и субпродуктов из средней пробы материала отвешивают навеску в 25 г, нарезают ножницами на мелкие кусочки, последние растирают в стерильной фарфоровой ступке с небольшим количеством стерильного физиологического раствора или дистиллированной воды, затем суспензии переливают в колбы, встряхивают и отстаивают в течение 10-15 мин для осаждения крупных частиц, надосадочную жидкость переносят в колбу, содержащую 100 мл И-бульона и тщательно перемешивают.

2.3.7. Пробы мясного фарша, сырого молока и полученных из него сливок в количестве по 25 г вносят в колбы, содержащие 100 мл И-бульона, которые встряхивают в течение 2-3 мин с целью размешивания материала.

2.3.8. Для исследования овощей (корнеплодов) из сборной пробы делают навески по 0,5 кг, обмывают поверхность корнеплодов ватно-марлевыми стерильными тампонами, смоченными стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой, которые затем погружают в колбу со стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой в объеме 80-100 мл.

2.3.9. Пробы растительных кормов отбирают в количестве 25 г, измельчают предварительно прокипяченными ножницами или ножом на мелкие кусочки и вносят в колбы со 100 мл И-бульона, закрывают стерильными резиновыми пробками и тщательно встряхивают в течение 10-15 мин вручную или на шуттель-аппарате.

2.4. Выделение и изучение культур иерсиний

2.4.1. Пробирки (колбы) с засеянным исследуемым материалом в И-бульоне инкубируют при температуре 30-32°С в течение 24 ч.

2.4.2. Культуры, полученные в И-бульоне, пересевают бактериологической петлей частыми широкими штрихами в отдельные чашки Петри с И-агаром или одной из плотных питательных сред (см. п.2.3.2) по всей поверхности агара или на отдельные секторы чашек, которые помещают в термостат на 48 ч.

2.4.3. Через 24-48 ч учитывают характер роста колоний, выросших в чашках Петри на поверхности одной из плотных питательных сред, визуально и с помощью лупы.

Характер роста Y. enterocolitica на различных средах

Исследование бактерий имеет большое практическое значение для человека. На сегодняшний день открыто большое количество прокариот, которые отличаются друг от друга по патогенности, области распространения, форме, размерам, количеству жгутиков и другим параметрам. Чтобы детально изучить данный штамм, применяется бактериологический метод исследования.

Какие существуют методы анализа бактериальных клеток?

Чтобы определить, являются ли бактерии патогенными, проводят исследование культуры различными способами. Среди них:

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологический метод.

3. Биологический метод.

Бактериоскопический и бактериологический методы исследования основаны непосредственно на работе с клетками прокариот, когда биологический анализ требуется для изучения влияния таких клеток на живой организм подопытных животных. По степени проявления тех или иных признаков заболевания ученый может сделать вывод о наличии или отсутствии патогенных бактерий в пробе, а также естественно их размножить в организме животного для получения их культуры и использования в других работах.

Бактериологический метод исследования отличается от бактериоскопического. В первом для анализа используется специально подготовленная культура живых прокариот, когда во втором проводится работа с мертвыми или живыми клетками на предметном стекле.

Этапы бактериологического метода исследования. Микробиология

Принцип изучения свойств бактериальной культуры может пригодиться как для ученых-микробиологов, которые поставили цель исследовать прокариотические клетки, так и для лаборантов, задача которых заключается в установлении патогенности или непатогенности бактерий, а затем диагноза пациента.

Методика изучения бактерий делится на три этапа:

1. Выделение бактерий из первоначальной пробы.

2. Высевание бактерий и выращивание чистой культуры, изучение ее свойств.

3. Детальное исследование бактериальных клеток.

Проба, или мазок, берется со свободной поверхности среды или у пациента. Таким образом мы получаем «коктейль» из множества видов бактерий, которые должны высеять на питательную среду. Иногда появляется возможность выделить сразу необходимые бактерии, зная их очаги распространения в организме.

Через двое-трое суток отбираются нужные колонии и высеваются на твердые среды чашек Петри с помочью стерильной петли. Во множестве лабораторий работают с пробирками, где может находиться твердая или жидкая питательная среда. Так и проводится бактериологический метод исследования в микробиологии.

После получения отдельных колоний бактерий проводится непосредственный макро- и микроанализ. Измеряются все параметры колоний, определяется цвет и форма каждой из них. Нередко проводится подсчет колоний на чашке Петри, а затем в исходном материале. Это имеет значение при анализе патогенных бактерий, от числа которых зависит степень заболевания.

Бактериологический метод исследования, 2 этап которого заключается в изучении отдельных колоний микроорганизмов, может быть сопряжен с биологическим способом анализа бактерий. Еще одна цель работы на этом этапе – увеличить количество исходного материала. Это можно сделать на питательной среде, а можно провести эксперимент в естественных условиях на живых подопытных организмах. Патогенные бактерии будут размножаться, и в результате кровь будет содержать миллионы клеток прокариот. Из взятой крови легко приготовить необходимый рабочий материал бактерий.

Самая важная часть исследования – это определение морфологических, биохимических, токсигенных и антигенных свойств культуры бактерий. Работа ведется с заранее «очищенными» культурами на питательной среде, а также с препаратами (зачастую окрашенными) под микроскопом.

Установить принадлежность патогенных или условно-патогенных бактерий к той или иной систематической группе, а также определить их устойчивость к лекарствам позволяет бактериологический метод исследования. 3 этап – антибиотики, т. е. анализ поведения клеток бактерий в условиях содержания лекарственных препаратов в окружающей среде.

Исследование устойчивости культуры к антибиотику имеет важное практическое значение, когда необходимо прописать для конкретного пациента необходимые, а главное, действенные препараты. Здесь и может помочь бактериологический метод исследования.

Что такое питательная среда?

Для развития и размножения бактерии должны находиться в заранее подготовленных питательных средах. По консистенции они могут быть жидкие или твердые, а по происхождению – растительные или животные.

Основные требования к питательным средам:

2. Максимальная прозрачность.

3. Оптимальные показатели кислотности, осмотического давления, активности воды и других биологических величин.

Получение изолированных колоний

1. Метод Дригальского. Он заключается в том, что на бактериальную петлю наносится мазок с различными видами микроорганизмов. Этой петлей проводят по первой чашке Петри с питательной средой. Далее, не меняя петлю, методом остаточного материала проводят по второй и третьей чашкам Петри. Так, на последних образцах колонии бактерии будут засеваться не слишком плотно, тем самым упрощается возможность найти необходимые для работы бактерии.

2. Метод Коха. В нем используются пробирки с расплавленной питательной средой. Туда помещается петля или пипетка с мазком бактерий, после чего содержимое пробирки выливается на специальную пластинку. Агар (или желатин) застывает через какое-то время, а в его толще легко обнаружить нужные колонии клеток. Важно перед началом работы развести смесь бактерий в пробирках, чтобы концентрация микроорганизмов не была очень большой.

Бактериологический метод исследования, этапы которого основаны на выделении нужной культуры бактерий, не обходится без этих двух способов нахождения изолированных колоний.

Антибиотикограмма

Визуально реакцию бактерий на препараты можно заметить двумя практическими способами:

1. Метод бумажных дисков.

2. Разведение бактерий и антибиотика в жидкостной среде.

Метод бумажных дисков требует наличия культуры микроорганизмов, которые были выращены на твердой питательной среде. На такую среду кладут несколько бумажек округлой формы, пропитанных антибиотиками. Если препарат успешно справляется с нейтрализацией бактериальных клеток, после такой обработки останется участок, лишенный колоний. Если же реакция на антибиотик отрицательная, бактерии выживут.

В случае использования жидкой питательной среды сперва готовят несколько пробирок с культурой бактерий разных степеней разведения. В эти пробирки добавляют антибиотики, и в течение суток наблюдают за процессом взаимодействия вещества и микроорганизмов. В конечном итоге получается качественная антибиотикограмма, по которой можно судить об эффективности препарата для данной культуры.

Основные задачи анализа

Здесь перечислены по пунктам цели и этапы бактериологического метода исследования.

1. Получить исходный материал, который будет использоваться для выделения колоний бактерий. Это может быть мазок с поверхности любого предмета, слизистой оболочки или полости органа человека, анализ крови.

2. Выращивание культуры на твердой питательной среде. Через 24-48 часов на чашке Петри можно обнаружить колонии бактерий разных видов. Отбираем по морфологическим и/или биохимическим критериям нужную и проводим уже с ней дальнейшую работу.

3. Размножение полученной культуры. Бактериологический метод исследования может опираться на механический или биологический способ увеличения численности культуры бактерии. В первом случае ведется работа с твердыми или жидкими питательными средами, на которых в термостате размножаются бактерии и образуют новые колонии. Биологический способ требует естественных условий увеличения численности бактерий, поэтому здесь микроорганизмами заражается подопытное животное. Через несколько суток в пробе крови или мазке можно обнаружить множество прокариот.

4. Работа с очищенной культурой. Чтобы определить систематическое положение бактерий, а также их принадлежность к возбудителям заболеваний, необходимо провести тщательный анализ клеток по морфологическим и биохимическим признакам. При исследовании патогенных групп микроорганизмов важно знать, насколько эффективно действие антибиотиков.

Это была общая характеристика бактериологического метода исследования.

Особенности проведения анализа

Главное правило проведения бактериологического исследования – это максимальная стерильность. Если идет работа с пробирками, посевы и пересевы бактерий должны проводиться только над нагретой спиртовкой.

Все этапы бактериологического метода исследования требуют использования специальной петли или пастеровской пипетки. Оба инструмента должны быть предварительно обработаны в пламени спиртовки. Что касается пастеровской пипетки, то тут перед термической стерилизацией необходимо отломать кончик пипетки пинцетом.

Техника посева бактерий тоже имеет свои особенности. Во-первых, при посеве на твердые среды проводят бактериальной петлей по поверхности агара. Петля, конечно же, уже должна иметь на поверхности образец микроорганизмов. Также практикуется посев внутрь питательной среды, и в этом случае петля или пипетка должны достичь дна чашки Петри.

При работе с жидкими средами используются пробирки. Здесь важно следить, чтобы жидкости не касались краев лабораторной посуды или пробки, а используемые инструменты (пипетка, петля) не дотрагивались до посторонних предметов и поверхностей.

Значение биологического метода исследования

Анализ пробы бактерий имеет свое практическое применение. Прежде всего бактериологический метод исследования может использоваться в медицине. К примеру, необходимо изучить микрофлору больного, чтобы установить правильный диагноз, а также выработать правильный ход лечения. Здесь помогает антибиотикограмма, которая покажет активность лекарственных препаратов против возбудителя заболеваний.

Анализ бактерий используется в лаборатории для определения таких опасных заболеваний, как туберкулез, возвратный тиф или гонорея. Также он применяется для изучения бактериального состава миндалин, полостей органов.

Бактериологический метод исследования можно использовать для определения загрязненности среды. По данным о количественном и качественном составе мазка с поверхности какого-либо предмета определяется степень заселенности данной среды микроорганизмами.

Инструкция по взятию и доставке биологического материала для лабораторных исследований в диагностическую лабораторию «ДНК-ЦЕНТР».

Бактериологическое исследование

Материалом для бактериологического исследования являются мазок из урогенитального тракта, моча, мокрота, мазки из зева, носа, уха, конъюнктивы глаза, раневое отделяемое.

Рекомендуется прекращение применения антибактериальных препаратов за 7-10 дней до взятия материала.

Мазки из ран, зева, носа, уха, урогенитального тракта берут в специальные транспортные контейнеры TRANSYSTEM AMIES W/O CH (в комплект входят стерильный зонд для взятия материала и пробирка с транспортной средой).

Взятие материала должно быть осуществлено с соблюдением правил асептики.

  • Материал из ран берут стерильным зондом, по возможности, из более глубоких отделов, очистив рану от отмерших тканей, т.к. верхние отделы могут содержать сапрофитную микрофлору. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.
  • Мазок из зева берется натощак стерильным зондом с воспаленных участков, при налетах (по краю их) и при пленках — из глубины крипт миндалин, задней стенки глотки, дужек, языка. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.
  • Мазок из носа, уха берется стерильным зондом. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.
  • Мазок с конъюнктивы глаза берется специальным глазным шпателем врачом-офтальмологом. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.
  • Материал из уретры у мужчин берут стерильным зондом, производя соскоб на глубине 3-4 см. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.
  • Материал из уретры у женщин берут стерильным зондом, вводимым на глубину 1,5-2,0 см, получая отделяемое стенок уретры. Зонд с материалом помещается в пробирку с транспортной средой.
  • Материал из цервикального канала шейки матки берут с помощью стерильного зонда, вводя его в цервикальный канал на 1,0-1,5 см и осторожно поворачивая, вынимают, не прикасаясь к стенкам влагалища и помещают в транспортную среду.

Материал, взятый в транспортные контейнеры, хранится при комнатной температуре и доставляется в лабораторию в течение 1-2 суток с момента забора.

Исследование микрофлоры мочи проводится в средней порции утренней мочи после тщательного туалета наружных половых органов. Мочу собирают в стерильный стакан с крышкой в количестве не менее 30 — 50 мл и доставляют в лабораторию в течение 1,5 — 2 час. Длительное хранение мочи при комнатной температуре до исследования приводит к изменению физических свойств, разрушению клеток и размножению бактерий, что может привести к ложноотрицательному или недостоверному результату исследования.

Исследование вагинальной микрофлоры. Материалом для исследования служит вагинальный секрет. Материал берется одноразовой ложечкой Фолькмана (одна полная ложечка) и помещается в специально приготовленную для данного анализа жидкую среду. Взятый материал в течение суток должен быть доставлен в лабораторию. Жидкая среда, подготовленная для данного анализа храниться в холодильнике при +4ºС, срок хранения 1 неделя с момента получения.

Общий анализ мочи

Перед сдачей мочи на анализ нежелательно применение лекарственных веществ, т.к. некоторые из них оказывают влияние на результаты исследований. Для общего анализа мочу собирают утром натощак сразу после сна. Перед сбором мочи проводят тщательный туалет наружных половых органов, затем промежность вытирают насухо в направлении от половых органов к заднему проходу. По возможности надо собирать мочу сразу в посуду, в которой она будет доставлена в лабораторию. При исследовании утренней мочи (для общего анализа) собирают 100 мл утренней мочи в сухую, чистую (не обязательно стерильную, отмытую от чистящих и дезинфицирующих средств) посуду, при свободном мочеиспускании. Посуда с мочой плотно закрывается крышкой. Моча, собранная для общего анализа, может храниться не более 1,5-2 час.

Длительное хранение мочи при комнатной температуре до исследования ведет к разрушению в ней эритроцитов и других клеточных элементов, к изменению физических свойств и размножению бактерий, что может привести к ложноотрицательному или недостоверному результату исследования.


Статьи по теме